Introdução: Biomateriais são substâncias de origem sintética ou natural que estimulam sistemas biológicos que deixaram de ter suas funções, como por exemplo a regeneração óssea, cuja remodelação e cicatrização dos tecidos dependem da manutenção de um equilíbrio delicado entre a reabsorção óssea por osteoclastos e a formação óssea por osteoblastos. A aplicação de biomateriais a base de poli(hidroxibutirato) (um polímero natural biodegradável e biocompatível) e norbixina (um carotenoide antioxidante), para fins de reparo ósseo, apesar de promissora, ainda é desconhecida. Objetivo: Verificar a eficácia da membrana de poli(hidroxibutirato) e norbixina como scaffold em defeitos ósseos induzidos na tíbia de ratos. Materiais e Métodos: Esta pesquisa foi aprovada pelo CEUA (nº protocolo 00057/18). A amostra consistiu em 24 ratos machos Rattus novergicus divididos em dois grupos (n= 6, cada): A – controle, B – membrana. Os animais foram anestesiados com xilazina 2% e cetamina 10% com dose de 0,1mL para cada 100g de peso corpóreo e o defeito foi induzido em uma região proximal da tíbia direita com broca do tipo trefina de 3mm acoplada a um micromotor cirúrgico de alta rotação, seguido da implantação do biomaterial no local da lesão apenas no grupo membrana. Os animais foram eutanasiados aos 15 e 30 dias. As tíbias foram removidas e fixadas em nitrogênio líquido para conservação. As dosagens bioquímicas dos marcadores do metabolismo ósseo (fosfatase alcalina, fosfatase ácida, cálcio e fósforo), a deposição de matriz orgânica e inorgânica (espectroscopia raman), a qualidade do tecido ósseo neoformado (análise histopatológica) e a morfologia do defeito ósseo (microscopia eletrônica de varredura) foram mensurados ao longo do processo de reparo. Resultados: Não houve diferenças significativas entre as dosagens bioquímicas ao longo do experimento. Aos 15 dias do experimento, os espectros Raman revelaram que o tratamento com biomaterial influenciou significativamente a deposição de cristais de hidroxiapatita (~ 960 cm-1) (p<0,0001), a formação de matriz de colágeno I (~ 2940 cm-1) (p<0,05), teor de mineralização (v1PO4 3-/amida III p<0,0001, v1PO4 3-/CH2 p<0,0001 e CO3 2- /v1PO4 3- p<0,001) e cristalinidade (p<0,0001) em relação ao grupo controle; morfologicamente, observou-se uma regressão do sítio da lesão e organização do osso neoformado tratado com biomaterial. Após 30 dias do experimento, não houve diferenças significativas entre os grupos analisados. Conclusão: O biomaterial atuou como scaffold na regeneração do defeito ósseo guiado por meio da aceleração da síntese de matriz de colágeno, teor de mineralização e maturidade quando comparado ao grupo controle, exibindo biocompatibilidade, osteocondutividade e osteogênese a partir dos 15 dias de período experimental, representando uma opção promissora para o tratamento de fraturas.